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淋巴细胞分离液操作步骤是哪些?

2021-10-31      556
  淋巴细胞分离液是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异,通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。淋巴细胞分离液操作步骤是哪些?
  使用操作步骤:
  (1)取新鲜抗凝全血或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。
  (2)在离心管中加入适量分离液,将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。
  (3)室温,水平转子500~1000g,离心20~30min。
  (4)离心后将出现明显的分层:上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。
  (5)小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中,10mLPBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。
  (6)弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。
  (7)重复步骤6;
  (8)弃上清,细胞重悬备用。
  淋巴细胞分离液的原理:
  外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同.淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075∽1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
  基本应用:
  可用于体外分离外周淋巴血细胞,也可以从其他来源中分离单核细胞,包括脐带血细胞和骨髓细胞,适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞,在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。
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